早產兒母乳喂養和巨細胞病毒的傳播。病例報告和動能CMV-DNA母乳

背景

母乳喂養對巨細胞病毒流行病學有重大影響。產後巨細胞病毒激活的發病率在哺乳期是孕產婦seroprevalence附近。盡管圍產期新生兒巨細胞病毒感染已經幾乎沒有後果,術語,在某些情況下,這可能會導致嚴重的症狀疾病早產新生兒。

本研究的目的是評估率和巨細胞病毒感染的臨床表現在早產兒母乳傳播並檢查母乳冷凍治療的安全性。

方法

這項研究包括57個早產兒和巨細胞病毒血清反應陽性的母親。已收集到的新鮮母乳樣本1^聖到9^th產後一周。新鮮的母乳和72、96、120小時冷凍樣本已檢查,檢查巨細胞病毒的存在;已測試尿液樣本。

結果

70.2%的母親測試顯示激活的感染,在產後6周和CMV-positive母乳被發現。然而,隻有一個嬰兒被巨細胞病毒感染,發展中肝感情與多係統參與,如巨細胞病毒DNA檢測尿液、唾液、血液、胃管、凳子。

結論

冷凍母乳分別為-20°C和巴氏滅菌法可以減少或消除病毒載量。

人類母乳是新生兒的理想食品,對術語和早產兒,因為它的營養價值,獨特的品質和屬性。但是它也可以成為車輛對病毒和細菌感染,母乳喂養是已知的一個主要影響產後巨細胞病毒(CMV)感染的流行病學1]。因為一個未知的機製,在女性母乳喂養期間anti-CMV IgG抗體陽性病毒再活化可以發生在乳腺和巨細胞病毒通常在牛奶沒有中排出的臨床或實驗室全身感染的跡象(-血清IgM -病毒尿)2]。在過早和/或低出生體重嬰兒(激光焊),然而,嚴重的後果可能帶來的乳房milk-acquired巨細胞病毒感染。目前,早產兒母乳感染巨細胞病毒的風險不guideline-filed被識別(3,4]。

這項研究的目的是評估率和巨細胞病毒感染的臨床表現通過母乳傳播在早產兒,出生32孕周之前和/或加權≤2000克出生時,檢查安全的母乳冷凍治療。

病人

這項研究已經由新生兒學教學醫院的重症監護室(NICU),在佩魯賈(意大利)1^聖2004年1月31日^聖2007年12月。五十7名早產兒和他們的母親,他們發現巨細胞病毒血清反應陽性的,包括在前瞻性研究。研究包括早產嬰兒的< 32周完成,或加權< 2000克出生時。自第二次生命的一天。每一個新生兒被naso-gastric美聯儲管(NGT)。

外周血樣本已經被從母親分娩後,巨細胞病毒抗體測試,以確定產婦血清學。巨細胞病毒免疫球蛋白免疫球蛋白和IgM抗體已經確定,使用酶免疫測定試劑盒(巨細胞病毒免疫球蛋白:Diamedix邁阿密佛羅裏達美國、巨細胞病毒IgM: Diasorin Saluggia意大利)。

微生物學

已收集新鮮的母乳樣本從1日到9日產後一周。新鮮的母乳和72、96、120小時冷凍樣品已經測試,檢查巨細胞病毒的存在。牛奶樣品申請,分為細胞和水通過離心獲得分數。病毒隔離。巨細胞病毒文化一直在進行水分數,使用快速殼瓶對MRC-5細胞組織培養(Vircell,聖達菲,西班牙)。兩天後孵化在37°C,即早期的文化一直在測試檢查存在IE1和IE2 (MW 68 - 72 kDa)巨細胞病毒抗原通過直接免疫熒光法,使用FITC-labelled單克隆抗體(Chemicon光診斷,泰梅庫拉、鈣、美國)。牛奶樣品DNA提取了easyMAG (bioMerieux、馬西l 'Etoile、法國)作為分子測試嵌套PCR被用作篩選試驗,和定量實時聚合酶鏈反應(rt - PCR)已經被用來量化病毒DNA的負載(Nanogen高級診斷開發。,Buttigliera阿爾塔、都靈、意大利)。所有樣本化驗。消極的控製(蒸餾水)和一個積極的控製(從巨細胞病毒基因組DNA構造)已包括在每個嵌套PCR。最低檢測極限是10張/ 5μl 105基因組/ ml,分別為嵌套PCR和rt - PCR。 Milk has been collected together with urine samples, to determine the viruria through quantitative and qualitative methods. Each infant has been fed by thawed maternal 72 hours frozen breast milk. Clinical status and laboratory tests have been documented during the study time. By informed consent, the parents of participating infants agreed them to be included in this study.

牛奶樣品

以前的病毒感染的母親發現了免疫球蛋白對巨細胞病毒血清陽性,IgM的缺席。在40的57血清反應陽性的母親(70.2%)病毒再活化和排泄的牛奶在六周產後哺乳期間。孕產婦母乳巨細胞病毒激活被病毒傳染所示(圖1)與血清免疫球蛋白但消極IgM陽性,和消極的病毒尿。

沒有統計上的顯著差異(p = 0.36)在巨細胞病毒動力學的值,比較積極的樣品總樣本檢查在不同的星期。初乳的大多數樣本巨細胞病毒DNA陽性(31 57,54.4%)和大多數牛奶樣品成為巨細胞病毒DNA陽性兩周後交付(33 52,63.5%)。期間研究的109個樣本進行測試和巨細胞病毒DNA複製的最高價值,介於10⁴到10⁶拷貝/毫升,顯示從4到6周後交付。在此期間平均DNA負載是61958,8±15818,3拷貝/毫升。此後,DNA拷貝數逐漸減少。72 h凍結過程是能夠顯著減少傳染性的,如圖所示由病毒文化和病毒載量(約75%(圖2)。然而,積極的樣品保持積極的PCR檢測時,由於病毒DNA檢測,即使是在滅活很少巨細胞病毒粒子的存在。

嬰兒

的平均孕齡新生兒是29周(範圍23-34周)。平均出生體重是1158±436.3克。在與巨細胞病毒DNA-positive母乳喂養的嬰兒,隻有一個感染了巨細胞病毒。考慮所有的檢查女性產後新生兒感染暴露率為2.5%:圍產期感染的比率是1.7%。產後感染率(2.5%)認為,因為嬰兒巨細胞病毒陽性8周出生後,母親的血清學測試並沒有改變,顯示巨細胞病毒IgM陰性和免疫球蛋白陽性。這個結果表明,產婦巨細胞病毒激活不是係統性隻發生在乳房。

所有的嬰兒隨訪檢測長期sequele先天性和圍產期感染巨細胞病毒描述:每個嬰兒進行了連續監測(3^{理查德·道金斯}6日,^th12日,^th24日,^th在36^th月5日^th正確的妊娠年齡)。迄今為止從招生(至少3年),沒有一個人提出了健康問題與巨細胞病毒感染,包括症狀的嬰兒。

病例報告

嬰兒感染了巨細胞病毒通過剖腹產出生的,進行的選舉因為先兆子癇和宮內生長遲緩,28周時和3天,出生體重740克。他最初治療呼吸窘迫綜合征和hyperbilirubinaemia。在生命的第一天,一個廣泛的抗生素治療以及免疫球蛋白IgM-enriched管理,由於缺乏的c反應蛋白的增加價值的其他臨床症狀。然而,所有測試執行檢測細菌感染是負麵的:胃願望和氣管支氣管的願望,包括文化測試支原體和Clamidia和血培養。歲30天,新生兒發展共軛hyperbilirubinaemia,肝髒超聲顯示膽囊收縮按照壁增厚有關。47天,新生兒的臨床狀況惡化:血清c反應蛋白水平升高和嬰兒被發現又有多個抗生素治療,因為懷疑敗血症,即使血液和尿液培養結果為陰性。膽汁鬱積指標惡化(膽紅素總14,99 mg / dL,膽紅素共軛8日31 mg / dL, AST 493 U / L, ALT 183 U / L, GGT 98 U / L)。此外,尿液中巨細胞病毒DNA證據的存在,唾液和血液,CMV-specific IgM抗體呈陽性血清。消化係統的參與,巨細胞病毒的存在證實了大量的病毒DNA複製的PCR檢測胃管和凳子。排除了先天性傳播負麵巨細胞病毒DNA檢測從臍帶和Guthrie卡,即使使用實時PCR高度敏感。 Clinical improvement occurred in accordance with intravenous ganciclovir therapy (7、5毫克/公斤/ /天死兩次5天)其次是管理纈(25毫克/公斤/死六個月)(5]。直到negativization病毒載量逐漸減少。分子的巨細胞病毒菌株分離從嬰兒的尿液是區別與孕產婦母乳,表明通過母乳巨細胞病毒垂直傳播。

膿毒症——比如綜合症在早產兒可以獲得產後巨細胞病毒感染造成的,據一些研究[4]、[6- - - - - -8]。為了闡明巨細胞病毒感染的母乳喂養在傳播中的作用,本研究分析了前瞻性產假巨細胞病毒激活在哺乳和主要的母乳喂養的早產兒感染的臨床結果。母乳中乳清巨細胞病毒DNA檢測的可靠性比未分離牛奶或牛奶細胞(9- - - - - -12]。有很高比例的巨細胞病毒激活在縱向篩選血清反應陽性的母親在哺乳期間被發現通過rt - pcr,母乳中檢測到病毒DNA從40的57血清反應陽性的母親(70.17%)。

母乳巨細胞病毒再活化的機理,牛奶的作用細胞和遊離病毒垂直傳播仍然是未知的(10]。孕產婦巨細胞病毒傳播的風險因素被認為是早期病毒DNA和傳染性病毒的排泄牛奶乳清。母乳喂養的時間與巨細胞病毒感染的收購了嬰兒。病毒載量母乳中沒有相關的巨細胞病毒傳播。動能PCR分析執行期間收集的母乳表示,一些樣品交付後第一周-巨細胞病毒;病毒DNA成為檢測在大多數樣品的第三周,但在總樣本檢測拷貝數增加從4到6周之後和減少。由於巨細胞病毒感染的孵化時間是30至120天,母嬰感染通過母乳傳播不應該發生,直到至少6周後交付。然而,需要更詳細的研究來闡明牛奶的巨細胞病毒激活動力學清晰地揭示傳播的危險因素。隻在一個案例中巨細胞病毒DNA檢測尿液中8周後交付。新生兒沒有交付,陰道分娩,因此他可能沒有感染巨細胞病毒誕生過程中從陰道分泌物。 Hamprecht et al. have reported that the transmission of CMV from breastfeeding mothers to their preterm infants could result in symptomatic CMV infections, such as sepsis-like disease, and that the early onset of symptomatic infections occurs only in extremely immature preterm infants [4,12]。

在先前的研究中,所有足月嬰兒巨細胞病毒進入尿在很長一段時間裏,和他們正常的臨床課程沒有後遺症,但兩個早產兒肺炎(13]。沒有提供足夠的證據對母乳的產婦產後病毒傳播的來源,其他報告所描述的症狀的早產嬰兒巨細胞病毒感染的臨床症狀包括中性粒細胞減少、血小板減少、肝脾腫大、肺炎(14,15]。在我們的研究中,我們發現巨細胞病毒傳播隻有1 47(2.5%)早產兒,有臨床症狀與巨細胞病毒感染(sepsis-like症狀,肝脾腫大),雖然病毒載量和巨細胞病毒DNA的檢出率(70.2%)母乳是很高的。我們的研究之間的差異和其他報告與研究相關的可能不是人口,自意味著胎齡和出生體重相似(29 vs 29周;分別為1158和1100克),而母乳存儲的差異。事實上,母乳喂養之前,一直保持在-20°C和保存72小時lactarium長期照顧。Hamprecht等人先前報道,25%的早產兒了巨細胞病毒感染,與原始母乳喂養後冷藏在4到10°C(最多12個小時10- - - - - -12]。巨細胞病毒感染沒有觀察到巨細胞病毒血清反應陰性的早產兒,再輔以傾斜母乳是巴氏殺菌或冷凍(14- - - - - -17]。然而,盡管檢測巨細胞病毒後加熱(10秒72°C)測試負,凍結隻能減少部分巨細胞病毒傳染性,尤其是當病毒負荷高(18]。這也許可以解釋發生在一個嬰兒巨細胞病毒的傳播。

總之,我們的研究證實,巨細胞病毒通過母乳傳播可能導致嚴重的臨床過程在早產兒但凍結可能高度降低傳輸速率。因為母乳喂養是健康和廣泛,早產兒的數量正在增加在最發達的國家,一個新的程序溫和病毒失活血清反應陽性的母乳是在我們實驗室評估,預防巨細胞病毒傳播在未來極早產兒(19,20.]。

巨細胞病毒:

CitoMegaloVirus

激光焊:

低出生體重

NGT:

鼻胃管

NICU:

新生兒學重症監護室

聚合酶鏈反應:

聚合酶鏈反應

rt - pcr:

實時聚合酶鏈反應

作者和聯係

1. 醫療和外科專業和公共衛生、公共衛生部分,佩魯賈大學醫學院通過德爾Giochetto 06125 PG、意大利

   曼Chiavarini &莉莉安娜史

2. 新生兒重症監護室,意大利佩魯賈的教學醫院

   羅西Patrizia Bragetti,瑪爾塔J & Ambra Fantauzzi

3. 微生物學、意大利佩魯賈大學醫學院

   ,亞曆山德拉隨後聖西尼再度解圍埃利奧•森西和羅伯托·Castronari

相應的作者

對應到莉莉安娜史。

相互競爭的利益

作者宣稱沒有利益衝突。

作者的貢獻

MC進行校準和起草的手稿和執行統計分析。PB研究的構想,並參與其設計和協調。參與這項研究的設計。電子商務進行巨細胞病毒文化。

RC進行分析和PCR。MJR參與的設計研究。房顫參加了序列比對。

所有作者閱讀和批準最終的手稿

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