跳轉到主要內容
下載

氣道上皮細胞功能的調製Pidotimod: NF-kB cytoplasmatic表達式及其核易位與TLR-2表達增加有關

beplay怎么下载安装體積39文章編號:29日(2013年)引用這篇文章

文摘

背景

複發性呼吸道感染發病率的最重要原因之一在童年。當免疫功能在很大程度上仍然不成熟,氣道上皮細胞起著主要的防守作用以來,除了提供一個物理屏障,它也參與了先天和適應性免疫反應。因此研究旨在評估在體外是否pidotimod,合成二肽能夠刺激炎症和免疫效應細胞,可以激活參與應對感染支氣管上皮細胞功能。

方法

BEAS-2B細胞係(人類支氣管上皮細胞感染replication-defective腺病毒12-SV40病毒混合)是培養在pidotimod麵前,有或沒有腫瘤壞死因子(TNF) -α或酵母聚糖評估:1)細胞間粘附分子(ICAM) 1表達,流式細胞術;b) toll樣受體(TLR) 2表達和生產,通過免疫熒光流式細胞術和免疫印跡;d)白介素8 (IL)釋放,通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA);e)激活extracellular-signal-regulated激酶(ERK1/2)磷酸化和核factor-kappa B (NF-kB)激活,免疫印跡。

結果

ICAM-1的組成型表達,引發釋放顯著上調TNF-α(ICAM-1)和由TNF-α和酵母聚糖(引發),但不是pidotimod。相比之下,增加TLR-2表達式被發現後接觸pidotimod 10和100μg /毫升(p < 0.05)和100年協會pidotimodμg /毫升+ TNF-α(p < 0.05)。免疫印跡分析證實,本構TLR-2表達接觸所有的刺激後顯著增加。最後,雖然顯著抑製全身的TNF-αERK1/2磷酸化在pidotimod, TNF-α和pidotimod都有效地誘導NF-kB蛋白表達在細胞質和核易位。

結論

通過不同影響ERK1/2 NF-kB, pidotimod TLR-2蛋白的表達增加,表麵分子參與先天反應的起始傳染性刺激。缺乏影響ICAM-1表達式,鼻病毒的受體,引發釋放,的中性粒細胞的趨化現象的因素(已經存在於網站的感染),可能代表保護功能。如果證實體內,這些活動可能,至少部分澄清這個分子的作用機製在氣道水平。

背景

呼吸道感染,如普通感冒,鼻竇炎,tonsillopharyngitis,中耳炎和tracheo-bronchitis,有或沒有氣道阻塞,年幼的孩子中非常普遍(1- - - - - -3]。這些感染不僅影響孩子的健康和幸福,但也產生高昂的醫療成本和間接成本的家庭和社會4,5]。實際上,平均而言,兒童經驗4 - 6每年上呼吸道感染(6),但當他們長大時,這些感染的發生率減少,可能由於一個更成熟的免疫防禦和改進解剖條件。最常見的病原體參與呼吸道感染複發的病因是人類鼻病毒(HRV)、腺病毒、副流感病毒病毒、呼吸道合胞病毒、腸道病毒,人類metapneumovirus和冠狀病毒,除了流感病毒、鼻病毒(6,7]。主要是由鼻病毒致病的作用,最常見的病原體的上、下呼吸道感染的嬰幼兒能夠誘導多種臨床結果,從無症狀感染到嚴重呼吸道疾病需要住院治療(6,8]。

被高度專業化的先天和適應保護免疫係統,呼吸道表麵作為選擇性障礙,維持組織的完整性隔間和阻礙入口吸入多數微生物病原體,刺激物和過敏原9]。除了提供一個物理和功能障礙外部代理,氣道上皮細胞也積極參與宿主炎症和免疫反應的起始通過早期炎症介質的釋放9,10]。通過其表麵的激活模式識別受體,檢測環境刺激,氣道上皮細胞分泌內源性危險信號,從而激活樹突狀細胞天然免疫與適應性免疫和橋接(9- - - - - -11]。

炎症介質的作用進行了廣泛的研究,在呼吸功能不全綜合征的發病機製(RIS),產生了幾種介質濃度增加的證據,如細胞分裂素,白細胞三烯,組胺,白細胞介素1、6和8,腫瘤壞死因子(TNF) -α,並由激活正常T細胞表達和分泌(咆哮)患者的鼻腔分泌物感冒(12- - - - - -14]。主機響應機製引發的病毒感染及其功效在保護主人,然而,極其複雜,遠未解決。此外一個誇張的炎症反應,可能會增加呼吸道的損傷水平,而不是防止感染(12- - - - - -15]。

多項研究表明,特異反應性和出席大型日托幼兒園期間與更常見的呼吸道感染相關年(16,17),隻有少數患者局部IgA和/或缺乏免疫球蛋白子類可以證明18]。然而,一個缺陷(不成熟的)炎症和/或免疫反應在氣道上皮水平也可能涉及19]。

與這種背景下研究旨在評估在體外是否pidotimod,合成二肽活性先天和適應性免疫(20.),可以調節氣道上皮細胞功能參與反應的呼吸道感染。我們評估細胞間粘附分子(ICAM) 1和2 toll樣受體(TLR)表達式,白介素8 (IL)釋放和調查可能參與蛋白質的複雜的核轉錄因子kappa-light-chain-enhancer激活B細胞(NF-kB)和激活extracellular-signal-regulated激酶(ERK) 1/2磷酸化。

材料和方法

細胞培養

人類支氣管上皮細胞(BEAS-2B行)(寫明ATCC馬納薩斯,弗吉尼亞州,美國),源自人類支氣管上皮細胞轉化的腺病毒(12-SV40混合病毒)是使用在所有的實驗中21]。這些細胞,上皮細胞保留電子顯微鏡的特性和顯示陽性染色細胞角蛋白抗體,是成長為單層1:1的混合物在實驗室的人類致癌作用(LHC) 9中(英傑公司生存研究實驗室;意大利米蘭)和RPMI 1640介質(EuroClone;意大利米蘭)。

Pidotimod準備

輕輕Pidotimod(純度99.6%)是由Valeas公司(意大利米蘭)。股票的標準溶液製備在PBS 35毫克/毫升的濃度(20.]。

評估細胞的生存能力

BEAS-2B服用pidotimod(100μg /毫升),10 ng / ml TNF-α或50μg /毫升酵母聚糖單獨使用或協會,在不同的時間(24和48 h),百分比生存能力是衡量台盼藍染料排除測試(EuroClone公司。、心肌梗死、意大利)[22]。細胞數在紐鮑爾室和可行的細胞檢測基於排除染料的能力。不能存活細胞由於細胞膜缺陷是藍色的。

流式細胞術

BEAS-2B細胞融合在12 90%培養板的pidotimod(10和100μg /毫升),10 ng / ml TNF-α,50μg /毫升酵母聚糖單獨使用或協會,或與pidotimod不同預處理的時間,然後用TNF-α或酵母聚糖刺激另一個24小時。對每個分析2×106細胞培養與FITC-Conjugated鼠標反ICAM-1(英傑公司開發。,San Giuliano Milanese, Italy) and with an anti-mouse TLR-2 (Santa Cruz Biotechnology Inc, Segrate, Milan, Italy) antibody for 1 h [22]。TLR-2表達式使用一隻山羊anti-mouse抗體檢測(Alexa Fluor488;英傑公司)。細胞被洗,resuspended PBS和立即用流式細胞儀分析了石中劍流式細胞分析儀(Becton Dickson、米蘭、意大利)使用細胞追求軟件(22]。平均熒光強度與控製使用一個無關緊要的isotype-matched鼠單克隆抗體染色。

免疫熒光顯微鏡

BEAS-2B細胞培養在8-well玻璃Labtek幻燈片(Nalge Nunc國際)在不同的實驗條件。細胞治療與100μg /毫升pidotimod或10 ng / ml TNF-α單獨使用或協會,24 h。BEAS-2B細胞被固定在冰冷的甲醇後5分鍾。阻塞BEAS-2B貼上了鼠標反TLR-2 Abs (TL2.1;聖克魯斯生物技術),然後用一隻山羊anti-mouse抗體(Alexa Fluor488;英傑公司)。

引發試驗

BEAS-2B細胞孵化24 h和10 ng / ml TNF-α,50μg /毫升酵母聚糖或pidotimod(100μg /毫升),在沒有或TNF-α和酵母聚糖。治療後上層清液收集和引發水平量化了酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(研發係統,明尼阿波利斯,美國),根據製造商的指示。

胞質提取物的準備TLR-2分析和激活extracellular-signal-regulated激酶(ERK) 1/2分析

TLR-2分析,BEAS-2B細胞增長到90%在24孔板融合和處理pidotimod(100μg /毫升),10 ng / ml TNF-α,50μg / ml酵母聚糖,單獨使用或協會,24 h。對於ERK1/2分析,細胞同樣鍍和培養融合然後暴露於pidotimod直到90%,TNF-α或TNF-αpidotimod, 5 - 60分鍾(23]。治療後細胞刮和細胞溶解裂解緩衝(20毫米Tris-HCl緩衝區(pH值7.4)),包含150毫米氯化鈉,EDTA 1毫米,1 nm EGTA, 1毫米原釩酸鈉,1% (v / v)特裏同x - 100, 1毫米PMSF, 10μg / ml亮抑酶肽,和10μg /毫升抑肽酶)5分鍾在冰上。溶菌產物被在12000 g離心5分鍾(23]。

細胞質和核提取物的準備NF-kB分析

BEAS-2B融合細胞被增加到90%在6孔板和處理100μg /毫升pidotimod, TNF-α或TNF-αpidotimod 1 h。提取被萊斯利·j·Crofford準備描述使用方法(24]。短暫,細胞在胞質resuspended緩衝區(10毫米玫瑰,pH值7.9,10毫米KC1, EDTA 0.1毫米,0.1毫米EGTA, 1毫米二硫蘇糖醇(德勤)和蛋白酶抑製劑)對冰15分鍾,之後,特裏同x - 100添加到最終的濃度為0.25%。完整的核被離心分離顆粒狀,胞質提取立即被凍結。原子核在高鹽緩衝resuspended (20 mM玫瑰,pH值7.9,400毫米納希,1毫米EDTA, EGTA 1毫米,1毫米德勤,和蛋白酶抑製劑)在4°C 15分鍾。核提取收集在13500 g離心5分鍾後在4°C。

免疫印跡分析

溶菌產物的蛋白質濃度測定使用Bio-Rad蛋白質分析。等量的蛋白質是解決10%或12% sds - page和轉移到PVDF膜。膜塗抹TLR-2和p65 NF-kB(聖克魯斯生物技術),總ERK1/2和磷酸化ERK1/2(細胞信號傳導、技術、貝弗利,媽,美國),GAPDH(羅福斯生物公司、貝、米蘭、意大利),核纖層蛋白A / C(聖克魯斯生物技術公司、貝、米蘭、意大利)(23]。孵化後HPR-conjugated anti-rabbit o anti-mouse抗體(細胞信號技術),樂隊被發現使用增強化學發光(ECL,皮爾斯、Celbio、意大利)和相關帶強度量化使用Versadoc成像係統模型3000 (Biorad實驗室、大力神、鈣、美國)。

統計分析

統計評估了使用統計軟件包GraphPad Prism 3.02 (GraphPad軟件、聖地亞哥、鈣、美國)。結果表示為平均值±標準平均誤差(SEM)和t測試或Mann-Whitney測試使用。概率值(P < 0.05)被視為具有統計學意義。

結果

氣道上皮細胞生存能力

評估BEAS-2B細胞通過台盼藍染料排除測試顯示24小時孵化後細胞生存能力> 90%,相似的文化包含pidotimod (10 e 100μg /毫升),酵母聚糖,TNF-αpidotimod +酵母聚糖或TNF-α(沒有顯示)。類似的結果暴露BEAS-2B細胞48 h(沒有顯示)。

ICAM-1氣道上皮細胞表達

調查的影響pidotimod ICAM-1表達式,BEAS-2B細胞暴露於pidotimod(100μg /毫升),TNF-α(10 ng / ml)或與pidotimod預處理對不同時間(4、12或24小時),然後用TNF-α刺激額外的24 h。抗體反ICAM-1細胞被染色。流儀獲得的結果分析表明,由BEAS-2B ICAM-1細胞的組成型表達顯著上調了24小時接觸的細胞TNF-α(p < 0.05),而不是pidotimod(圖1)。沒有改變ICAM-1表達式得到暴露的細胞pidotimod 36 h或48 h(圖1B)和沒有修改增加全身的TNF-αICAM-1表達觀察預處理細胞與pidotimod 4、12或24 h(圖1C)。

圖1
圖1

在BEAS-2B細胞ICAM 1表達。流ICAM-1表情細胞儀分析:一個)未經處理(CTR),對待TNF-α或pidotimod (pid 10和100μg /毫升)24小時;B)處理100μg /毫升pidotimod不同時期(24日36和48小時);C)預處理pidotimod不同時間(4、12和24小時),然後用TNF-α刺激額外的24 h。ICAM-1表達式是量化的平均熒光強度(MFI)縱坐標和橫坐標上顯示不同的文化條件。數據表示為均值±SEM。* p < 0.05與控製。顯示的結果是代表三個獨立的實驗。

全尺寸圖像

TLR-2氣道上皮細胞表達

分析TLR-2的表達,BEAS-2B細胞暴露在24 h pidotimod(10和100μg /毫升),TNF-α,酵母聚糖或pidotimod TNF-α或酵母聚糖。增強TLR-2接觸的刺激引起的表達檢測到免疫熒光顯微鏡(圖2),然後量化流儀分析和接觸之後才發現重大pidotimod 10或100μg /毫升(p < 0.05)和協會pidotimod 100 + TNF-α(圖(p < 0.05)2免疫印跡(圖B)3),光密度分析表明,在蛋白質水平,TNF-α也效果顯著(p < 0.05),酵母聚糖(p < 0.01)和組合與pidotimod酵母聚糖(圖(p < 0.01)3細胞的B)。Pre-incubation pidotimod 4、12或24小時沒有修改結果(沒有顯示)。

圖2
圖2

免疫熒光法和流式細胞術分析pidotimod TLR-2表達的誘導。(一個收集的)代表圖像TLR-2表達熒光顯微鏡在細胞培養(CTR)未經處理或處理TNF-α,酵母聚糖,pidotimod (Pid 100μg /毫升)或pidotimod (Pid 100μg /毫升)+ TNF-α24 h;B)直方圖顯示流儀分析TLR-2表達細胞接受TNF-α,酵母聚糖,pidotimod (Pid 100μg /毫升),或pidotimod (Pid 100μg /毫升)+ TNF-α(TNF-αPid或酵母聚糖(Zym + Pid, 24 h。TLR-2表達式是量化的平均熒光強度(MFI)縱坐標和橫坐標上顯示不同的文化條件。數據表示為均值±SEM . * p < 0.05與控製。顯示的結果是代表三個獨立的實驗。

全尺寸圖像
圖3
圖3

免疫印跡分析由pidotimod TLR-2表達式。(一個)代表TLR-2免疫印跡和GAPDH表達BEAS-2B孵化與介質(CTR)或接受TNF-α,酵母聚糖(Zym) pidotimod (Pid 100μg /毫升)或pidotimod (Pid 100μg /毫升)+ TNF-α或者酵母聚糖(Zym), 24 h。B)的光密度分析TLR-2表達式,規範化GAPDH,顯示的縱坐標和橫坐標上的不同的文化條件。數據表示為均值±SEM。* * * p < 0.05和p < 0.01與控製。顯示的結果是代表三個獨立的實驗。

全尺寸圖像

引發釋放

BEAS-2B細胞暴露在24 h pidotimod(100μg /毫升),TNF-α,酵母聚糖或TNF-α和pidotimod酵母聚糖。可檢測濃度引發發現僅在細胞培養介質的上層清液,顯著增加了24小時暴露在細胞培養TNF-α或酵母聚糖(p < 0.01,每個比較),但不要pidotimod(圖4)。TNF-α沒有進一步的修改或增加zymosan-induced觀察引發釋放的pidotimod細胞培養。最後,預培養的細胞與pidotimod沒有修改結果(沒有顯示)。

圖4
圖4

評估引發的分泌。引發的上層清液濃度BEAS-2B孵化與媒介本身(CTR)或接受TNF-α酵母聚糖(Zym) pidotimod (Pid 100μg /毫升),TNF-α和pidotimod (TNF-α、Pid或酵母聚糖和pidotimod (Zym + Pid 24 h,評估ELISA。引發表示為±SEM。* * p < 0.01與控製。

全尺寸圖像

ERK1/2途徑激活

ERK1/2分析,支流BEAS-2B細胞暴露在pidotimod TNF-α或TNF-αpidotimod 5到60分鍾。增加蘇氨酸/酪氨酸的磷酸化ERK1/2已經被西方墨點法在細胞暴露於TNF-α5分鍾,但不要pidotimod(100μg /毫升)(圖5A)。相比之下,添加pidotimod(100μg /毫升)細胞暴露於TNF-α誘導ERK1/2降低檢測磷酸化(圖5),光密度分析表明,抑製作用5點完成,30和60分鍾(圖5B)。

圖5
圖5

檢測ERK1/2磷酸化的蛋白質印跡。(一個)代表的磷酸化蛋白質印跡和總ERK1/2 BEAS-2B細胞治療(CTR)或暴露於TNF-αpidotimod (Pid) 5分鍾或TNF-αpidotimod (TNF-α+ Pid) 5 - 60分鍾。B)ERK1/2磷酸化的光密度分析,歸一化總ERK1/2顯示的縱坐標和橫坐標上的不同的文化條件。數據表示為均值±SEM . * p < 0.05與控製。顯示的結果是代表三個獨立的實驗。

全尺寸圖像

NF-kB表達和易位

與TNF-αBEAS-2B細胞治療,100μg /毫升pidotimod或TNF-αpidotimod 1 h。發現NF-kB細胞質和核提取物的免疫印跡分析。NF-kB p - 65表達調節後的胞質間接觸TNF-α或pidotimod NF-kB核易位(圖和關聯6A和B)。類似的結果在實驗中表現pidotimod 10μg /毫升(沒有顯示)。

圖6
圖6

免疫印跡檢測的NF-kB表達式。(一個)代表西方的屁股NF-kB p65水平在細胞質和核提取物BEAS-2B獨自與培養基培養(CTR)或暴露於TNF-α100μg /毫升pidotimod (Pid 100),或TNF-αpidotimod (TNF-α+ Pid 100) 24 h。GAPDH和層粘連蛋白A / C被用作管家蛋白。(B)的光密度分析NF-kB數據,歸一化GAPDH(細胞質)和層粘連蛋白A / C(核),顯示的縱坐標和橫坐標上的不同的文化條件。數據表示為均值±SEM。* p < 0.05與控製。顯示的結果是代表三個獨立的實驗。

全尺寸圖像

討論

使用BEAS-2B人類支氣管上皮細胞行我們已經證明pidotimod能夠誘導體外細胞變化可能有助於增強抗呼吸道感染宿主的能力。我們發現暴露BEAS-2B細胞pidotimod沒有影響ICAM-1表達和引發釋放,雖然可檢測upregulation TLR-2表達式是由熒光顯微鏡觀察,cytofluorimetry和免疫印跡分析。Pidotimod也有效地誘導的抑製TNF-α-induced ERK1/2磷酸化,相反,顯著增加NF-kB蛋白質表達和NF-kB核易位。

Pidotimod合成二肽分子生物學和免疫活動的適應性和先天免疫反應(25]。在體外研究中,從動物和人類標本,已經證明了一個重要的活動在先天和適應性免疫反應,解釋的臨床研究的結果,減少反複上呼吸道感染的速度已經觀察到(25- - - - - -27]。

新興證據從流行病學、臨床和動物實驗表明,病毒感染,呼吸道發病率的主要原因在年幼的孩子,是一個重要的環境刺激氣道損傷和重塑,導致支氣管代答,肺功能受損,可能持續哮喘(28]。PCR技術的可用性導致病毒檢出率顯著改善,表明hrv,主要是被稱為“感冒”病毒,參與哮喘的發病機製障礙的41 - 45%的兒童(29日]。大約90%的HRV不同血清型利用,作為特定的受體ICAM-1,表麵分子表達了氣道上皮細胞(30.]。HRV感染移植ICAM-1表情氣道上皮細胞,從而促進進一步病毒附件和條目31日]。除了hrv的主要受體,ICAM-1也參與了輪回在氣道上皮細胞層的中性粒細胞和激活(32),在疾病的特點是neutrophil-mediated急性肺損傷(33]。因此觀察,在我們的實驗模型pidotimod不增加本構或全身的TNF-αICAM-1表達式可能被解釋為“保護功能”,以避免增強對人類HRV和neutrophil-mediated損傷氣道表麵。一個類似的解釋可以引發釋放的結果。

引發是一個強大的中性粒細胞趨化因子和旁分泌調解人和滲透激活中性粒細胞起著關鍵的作用在肺部炎症和氧化損傷34],呼吸道病毒感染的特征[35,36]。

相反,pidotimod增強本構TLR-2表達,提高問題pidotimod在氣道上皮細胞的活性。表麵分子的表達(如ICAM-1和TLR-2)由不同的刺激(不僅是監管31日,37,38由不同的細胞內途徑),但也可能是由相同的刺激(38- - - - - -41]。一個例子是IFN-γ的活動,能夠有相反的影響ICAM-1和TLR-2表達式(分別——和下調)在不同的細胞類型(37,38,42]。pidotimod的特點,能夠調節不同的表麵分子的表達已經證明了Gourgiotis d和同事(43]。使用血液單核細胞,分離出過敏性哮喘和正常的孩子,他們通過未知的細胞內機製表明,pidotimod phytohaemoagglutinin下調CD30誘導的表達,但沒有影響人類白細胞抗原(HLA)是分子43]。

通常是一類蛋白質發揮關鍵作用在先天免疫係統中,識別結構保守分子來源於微生物(44]。通常是一種模式識別受體識別病原體分子廣泛使用但不能區分宿主分子,統稱其為分子模式(pamp)。的十個哺乳動物TLR蛋白質識別到目前為止,TLR-2似乎最不歧視,因為它承認許多細菌,真菌,病毒,和某些內源性物質(44,45]。pamp的識別結果在內化和吞噬作用的分子和細胞激活和釋放細胞因子,趨化因子和各種白細胞介素(44,45]。細胞因子參與這“非特異性免疫防禦包括各種白細胞介素,如TNF-αIL-1α,IL-1β,il - 6,引發和il - 12。PAMPs-TLR相互作用表麵的細胞能充分激活遊離鈣+NF-kB通量與誘導的氣道(46]。最近的研究涉及TLR,尤其是TLR-2地,作為前哨受體能夠信號與細菌病原體的宿主細胞之間的相互作用通過NF-kB-mediated通路(47]。有趣的是,使用表明,小鼠巨噬細胞將TLR-2信使rna可能是細菌感染後誘發一些細胞因子的參與,包括il - 1α,和gm - csf,但NF-kB對於最大TLR-2轉錄是必要的(48),進一步強調了NF-kB之間的緊密聯係和TLR-2。

pidotimod在BEAS-2B細胞的不同影響報道可能至少部分解釋為相反的影響產生的一些細胞功能ERK1/2磷酸化或NF-kB激活。

Extracellular-signal-regulated激酶(erk)或古典增殖作用(MAP)激酶廣泛表達的蛋白激酶細胞內信號分子參與減數分裂的規定,有絲分裂,也在幾個帖子有絲分裂功能,包括活動參與炎症和防禦過程(49,50]。這些包括ICAM-1和TLR-2表達相反的影響。與我們的結果一致BEAS-2B細胞,刺激ERK1/2磷酸化的半胱氨酰白三烯D4導致了ICAM-1表達增加了16 hbe支氣管上皮細胞,增強與嗜酸性粒細胞粘附[51]。相比之下,抑製ERK1/2磷酸化(52]老年病的MAP激酶phosphatase-1由海拉上皮細胞糖皮質激素增加TLR-2表達式。

NF-kB蛋白質複合體,在幾乎所有的動物細胞類型,發現控製DNA轉錄和參與細胞反應等多種刺激包括細菌或病毒抗原(53,54]。NF-kB起著關鍵的作用在調節快速感染免疫反應,因為它屬於“快速”的範疇主要轉錄因子,即存在於細胞的活性和不需要新的蛋白質合成被激活,參與活性氧的規定,細胞因子和粘附分子生產(54- - - - - -57]。

通常為特定的模式識別分子的識別和發現,不僅他們的表達是受NF-kB [42),而且TLR刺激導致NF-kB激活已經改善我們的理解先天和適應性免疫反應的感染。

令人驚訝的是,NF-kB pidotimod並未引起的激活導致引發釋放的增加。然而,在人類小鼠氣道上皮細胞培養和抑製ERK1/2磷酸化抑製引發生產引起的接觸子有毒劑量的鎘(58]。此外,其他轉錄因子參與引發生產和釋放,包括激活蛋白1 (AP-1)和信號傳感器和轉錄激活蛋白(統計)59,60]。而不是pidotimod,細胞內活性氧水平升高(ROS)在肺上皮細胞可以激活這些通路(60,61年]。因此,上遊的轉錄因子,ROS-sensitive信號通路,包括增殖蛋白激酶和蛋白激酶C,可能參與炎症基因活化的增加(56,57]。

結論

我們已經表明,pidotimod合成二肽用於預防兒童反複呼吸道感染的,能夠調節氣道上皮細胞功能參與宿主病毒可能通過NF-kB激活。明顯的局限性的研究實驗報告了在人類細胞係。如果證實體內,這些活動可能,至少部分澄清這個分子的作用機製在氣道水平。

縮寫

HRV:

人類鼻病毒

RIS:

呼吸功能不全綜合征

TNF-α:

腫瘤壞死factor-α

咆哮:

由激活正常T細胞表達和分泌

ICAM-1:

細胞間粘附molecule-1

TLR-2:

toll樣受體2

IL:

白介素

NF-kB:

核factor-kappa B

兵:

Extracellular-signal-regulated激酶

ELISA:

酶聯免疫吸附試驗

德勤:

二硫蘇糖醇

IFN-y:

幹擾素- y

HLA-DR:

人類白細胞antigen-DR

PAMP時:

其分子模式

MAP激酶:

增殖蛋白激酶

記者:

激活蛋白

統計:

信號傳感器和激活轉錄的蛋白質

ROS:

活性氧物種。

引用

  1. 瓦爾德,Guerra N,拜爾斯C:在兒童上呼吸道感染:持續時間和頻率的並發症。兒科。1991年,87:129 - 133。

    中科院PubMed穀歌學術搜索

  2. Harsten G, Prellner K, Heldrup J, Kalm O, Kornfalt R:兒童急性呼吸道感染。3年隨訪。Acta Paediatr Scand。1990年,79:402 - 409。10.1111 / j.1651-2227.1990.tb11484.x。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  3. Benediktsdottir B:學齡前兒童上呼吸道感染-頻率和風險因素。Scand J整潔的衛生保健。1993年,11:197 - 201。10.3109 / 02813439308994830。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  4. Banz K, Schwicker D,托馬斯問:經濟評價兒童的免疫預防複發的耳朵,鼻子和喉嚨感染。藥物經濟學。1994年,6:464 - 477。10.2165 / 00019053-199406050-00008。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  5. 科恩R, J,重新設計M,賓根E, Boucherat M, Bourrillon, Foucaud P,弗朗索瓦•米加尼葉JM,第5期,Ployet MJ, Schlemmer C, Gaudelus J:反複呼吸道感染:我們應該如何調查和治療?。拱Pediatr。2005年,12:183 - 190。10.1016 / j.arcped.2004.11.013。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  6. 嘉尼•海基寧T,賈維:普通感冒。柳葉刀》。2003年,361:51-59。10.1016 / s0140 - 6736 (03) 12162 - 9。

    文章PubMed穀歌學術搜索

  7. Principi N, Bosis年代,埃斯波西托年代:人類metapneumovirus兒科患者。Microbiol感染。2006年,12:301 - 308。10.1111 / j.1469-0691.2005.01325.x。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  8. Fuchs Kieninger E, O, Latzin P,弗雷U, Regamey N:鼻病毒感染在嬰兒期,童年早期。2012年歐元和j . Epub提前打印

    穀歌學術搜索

  9. 雷納德,伯格DJ, Sisson JH,馮·埃森SG Rubinstein,羅賓斯RA,他小:氣道上皮細胞:呼吸道疾病中的功能角色。150 J和保健醫療。1994 (5 Pt 2): S27-S30。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  10. O的焦點在於,Silvestri M,薩巴蒂F、銷售R, Defilippi AC,羅西GA:上皮細胞和成纖維細胞:結構修複和改造的航空公司。Paediatr和啟2004 5 (5 A): S35-S40。

    文章PubMed穀歌學術搜索

  11. Lambrecht BN, Hammad H:哮喘的氣道上皮細胞。Nat地中海。2012年,18:684 - 692。10.1038 / nm.2737。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  12. 齊藤T, Deskin RW, Casola一H, Olszewska B,恩斯特鉛、報警R, Ogra PL, Garofalo L:呼吸道合胞體病毒誘導選擇性生產上氣道上皮細胞的趨化因子咆哮。J感染說。1997年,175:497 - 504。10.1093 / infdis / 175.3.497。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  13. 麥克納馬拉PS,弗拉納根BF,哈特CA,史密斯RL:趨化因子的生產嚴重呼吸道合胞病毒毛細支氣管炎患兒的肺。J感染說。2005年,191:1225 - 1232。10.1086/428855。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  14. Greiff L,鐵刀木P,安德森M, Enander我,林登M,敏,佩爾鬆CG: rhinovirus-induced普通感冒的影響在過敏性鼻炎粒細胞活動。J感染。2002年,45:227 - 232。10.1053 / jinf.2002.1063。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  15. 消息SD,約翰斯頓SL:病毒感染的免疫學哮喘。2001年歐元和j . 18: 1013 - 1025。10.1183 / 09031936.01.00228701。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  16. 球TM, Holberg CJ,奧爾德斯MB,馬丁內斯FD,賴特艾爾:參加日托對普通感冒的影響從出生到13歲。地中海拱形Pediatr Adolesc。2002年,156:121 - 126。10.1001 / archpedi.156.2.121。

    文章PubMed穀歌學術搜索

  17. 馬Ciprandi G,托斯卡Fasce L:過敏的孩子更多,比非過敏性兒童嚴重呼吸道感染。Pediatr過敏Immunol。2006年,17:389 - 391。10.1111 / j.1399-3038.2006.00413.x。

    文章PubMed穀歌學術搜索

  18. Bossuyt X,摩恩L, Van Hoeyveld E, Jeurissen,博爾加特克,薩奧爾K, Proesmans M, Raes M, De Boeck凱西:共存(部分)的免疫缺陷和反複呼吸道感染的風險。2007年化學,53:124 - 130。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  19. 羅西GA,仙女C, Raynal我,Defilippi AC, Risso調頻,Schenone G, Pallestrini E, Melioli G:天然免疫反應對細菌通常參與上呼吸道感染:分析抗原唾IgA的水平。Immunol。2003年,86:85 - 91。10.1016 / s0165 - 2478 (02) 00290 - 0。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  20. Giagulli C, Noerder M,阿沃利奧正M,貝克爾PD, Fiorentini年代,古茲曼CA,卡魯索答:Pidotimod促進功能成熟的樹突細胞和輔助屬性顯示在鼻腔粘膜水平。Int Immunopharmacol。2009年,9:1366 - 1373。10.1016 / j.intimp.2009.08.010。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  21. Reddel RR,柯Y, Gerwin BI McMenamin MG,萊希摩根富林明,蘇RT,傲慢,公園JB, Rhim JS,哈裏斯CC:人類支氣管上皮細胞轉化SV40感染或adenovirus-V40混合病毒,或通過磷酸鍶共同沉澱與質粒轉染SV40包含地區早期的基因。癌症研究》1988年,48:1904 - 1909。

    中科院PubMed穀歌學術搜索

  22. Silvestri M, Serpero L, Petecchia L,薩巴蒂F, F Cerasoli,羅西GA: Cytokine-activated支氣管上皮細胞炎性ciclesonide體外功能有效地表達下調。Pulm雜誌。2006年,19:210 - 217。10.1016 / j.pupt.2005.05.006。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  23. Petecchia L F薩巴蒂,Usai C, Caci E, Varesio L,羅西GA:細胞因子誘導氣道細胞緊密連接拆卸通過EGFR-dependent MAPK / ERK1/2-pathway。實驗室投資。2012年,92:1140 - 1148。10.1038 / labinvest.2012.67。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  24. 唐納利RP, Crofford LJ,弗裏曼SL Buras J,雷默斯E,懷爾德RL,芬頓MJ:組織監管的il - 6生產il - 4。微分的影響il - 4核factor-kappa B活動在單核細胞和成纖維細胞。J Immunol。1993年,151:5603 - 5612。

    中科院PubMed穀歌學術搜索

  25. Riboldi P, Gerosa M, Meroni PL: Pidotimod:重新評價。Int J Immunopathol雜誌。2009年,22日:255 - 262。

    中科院PubMed穀歌學術搜索

  26. 羅薩萊斯Del-Rio-Navarro, Espinosa F, Flenady V, Sienra-Monge JJ:對預防兒童呼吸道感染免疫刺激劑。科克倫數據庫係統啟2006、4:CD004974 -

    PubMed穀歌學術搜索

  27. De la Torre GC,帕切科裏奧斯,埃斯卡蘭特Dominguez AJ, del Rio納瓦羅是:比較分析在墨西哥immunoestimulant代理用於兒科患者。牧師Alerg墨西哥人。2005年,52:25-38。

    穀歌學術搜索

  28. 先生我、羅森塔爾LA Sorkness RL, Lemanske射頻:病毒性呼吸道感染對肺的影響發展和兒童哮喘。J過敏Immunol。2005, 115: 668 - 674。10.1016 / j.jaci.2005.01.057。

    文章PubMed穀歌學術搜索

  29. 海曼PW,吹毛求疵的人HT,墨菲DD, Platts-Mills助教,‘J,麥克勞克林,歐文EA,除塵女士,Hellems M, Peerzada J,海登FG,哈特利TK,張伯倫R:病毒感染與年齡、特異反應性,入學兒童氣喘住院的季節。J過敏Immunol。2004, 114: 239 - 247。10.1016 / j.jaci.2004.04.006。

    文章PubMed穀歌學術搜索

  30. Oddera年代,Silvestri M, Lantero年代,焦點在於O,羅西GA: Downregulation表達的細胞間粘附分子(ICAM) 1 beta2-adrenoceptor支氣管上皮細胞的受體激動劑:非諾特羅。J哮喘。1998年,35:401 - 408。10.3109 / 02770909809048948。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  31. 爸爸,帕帕多普洛斯NG Stanciu洛杉磯,Bellettato厘米,Pinamonti年代,Degitz K,霍爾蓋特聖,約翰斯頓SL:減少代理抑製rhinovirus-induced老年病的鼻病毒受體細胞間粘附molecule-1 (ICAM-1)呼吸道上皮細胞。美國實驗生物學學會聯合會2002年j . 16: 1934 - 1936。

    中科院PubMed穀歌學術搜索

  32. 腎髒JC,驕傲的D:中性粒細胞輪回在人工氣道上皮細胞層:機製和電阻的依賴。我和細胞雜誌。2000年,23日:389 - 395。10.1165 / ajrcmb.23.3.4068。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  33. 穆裏根女士,史密斯連續波,安德森,托德•射頻Miyasaka M, Tamatani T, Issekutz結核病,病房PA:白細胞粘附分子在complement-induced肺損傷中的作用。J Immunol。1993年,150:2401 - 2406。

    中科院PubMed穀歌學術搜索

  34. Strieter RM, Kunkel SL:急性肺損傷:細胞因子的作用在中性粒細胞的啟發。J Investig。1994年,42:640 - 651。

    中科院PubMed穀歌學術搜索

  35. 埃弗拉德毫升,斯沃布裏克,Wrightham M,麥金太爾J, Dunkley C,詹姆斯PD, Sewell高頻,米爾納廣告:分析細胞通過支氣管灌洗與呼吸道合胞病毒感染的嬰兒。拱說孩子。1994年,71:428 - 432。10.1136 / adc.71.5.428。

    文章公共醫學中心中科院PubMed穀歌學術搜索

  36. 劉黃SH,曹XJ, W, XY,魏W:抑製褪黑素對肺癌的影響引起的氧化應激小鼠呼吸道合胞病毒感染。J鬆果體研究》2010年,48:109 - 116。10.1111 / j.1600 - 079 x.2009.00733.x。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  37. Othumpangat年代,Regier M, Piedimonte G:神經生長因子調節人類鼻病毒感染呼吸道上皮細胞通過控製ICAM-1表達式。是雜誌肺細胞摩爾雜誌。2012年,302:1057 - 1066。10.1152 / ajplung.00365.2011。

    文章穀歌學術搜索

  38. 瑞安弗洛TH, Halaas O,到達年代,L,留置權E, Dybdahl B, Sundan, Espevik T:微分toll樣受體2在人類細胞中表達。J Leukoc雜誌。2001年,69:474 - 481。

    中科院PubMed穀歌學術搜索

  39. JW EJ哦JH,公園,公園,李J,李SH, Kwon TK:細胞周期蛋白依賴性激酶抑製劑下調腫瘤壞死因子-α(tnf)全身的細胞粘附分子的表達,抑製NF-kappaB激活人類肺上皮細胞。Int Immunopharmacol。2010年,10:572 - 579。10.1016 / j.intimp.2010.02.004。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  40. 林FS,林CC,簡CS,羅科幻,楊厘米:參與頁/ p44 MAPK,物,NF-kappaB IL-1beta-induced ICAM-1表達在人類肺上皮細胞。細胞雜誌。2005年,202:464 - 473。10.1002 / jcp.20142。

    文章中科院穀歌學術搜索

  41. Talreja J, Kabir MH、B Filla M Stechschulte DJ, Dileepan KN:組胺誘發toll樣受體2和4表達內皮細胞,增強對革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌細胞壁的組件。免疫學。2004年,113:224 - 233。10.1111 / j.1365-2567.2004.01946.x。

    文章公共醫學中心中科院PubMed穀歌學術搜索

  42. 帕龐摩根富林明,Coste Gendron MC, Cordonnier C, Wingerstmann L, Peynegre R, Escudier E: HLA-DR ICAM-1表達式和調製從鼻息肉上皮細胞。喉鏡。2002年,112:2067 - 2075。10.1097 / 00005537-200211000-00030。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  43. Gourgiotis D,帕帕多普洛斯NG, Bossios Zamanis P, Saxoni-Papageorgiou P:免疫調製器pidotimod CD30的體外表達降低外周血單核細胞過敏性哮喘和正常的孩子。J哮喘。2004年,41:285 - 287。10.1081 /雅- 120026085。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  44. 彰,武田K, T: Kaisho toll樣受體:關鍵蛋白質連接先天和後天免疫。Nat Immunol。2001年,2:675 - 680。10.1038/90609。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  45. 彰,武田K: toll樣受體信號。Nat Immunol。2004年,牧師4:499 - 511。10.1038 / nri1391。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  46. 拉特納AJ,布萊恩·R,韋伯,阮年代,巴恩斯D,皮特,Gelber SE,張,一個王子:囊性纖維化病原體激活Ca2+依賴在氣道上皮細胞MAPK信號通路。生物化學雜誌。2001年,276:19267 - 19275。10.1074 / jbc.M007703200。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  47. 王T Lafuse WP Zwilling BS: toll樣受體2表達的調節巨噬細胞後,鳥結核分枝杆菌感染。J Immunol。2000年,165:6308 - 6313。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  48. 王T Lafuse WP Zwilling BS: NFkappaB和Sp1元素是必要的最大化的toll樣受體轉錄2鳥結核分枝杆菌引起的。J Immunol。2001年,167:6924 - 6932。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  49. Chang L,卡琳M:哺乳動物MAP激酶信號級聯。大自然。2001年,410:37-40。10.1038 / 35065000。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  50. Agell N,巴赫O, Rocamora N, Villalonga P:調製的Ras / Raf MEK / ERK通路Ca2+和鈣調蛋白。細胞信號。2002年,14:649 - 654。10.1016 / s0898 - 6568 (02) 00007 - 4。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  51. Profita M,薩拉,布萊諾,錫耶納L,費拉羅M, Di Giorgi R, Montalbano, d G,阿爾巴諾Gagliardo R, Gjomarkaj M:半胱氨酰leukotriene-1受體激活人類支氣管上皮細胞係導致信號傳感器和激活的轉錄1-mediated嗜酸性粒細胞粘附。藥理學和實驗治療的美國社會。2008年,325:1024 - 1030。10.1124 / jpet.107.131649。

    文章中科院穀歌學術搜索

  52. Imasato, Desbois-Mouthon C,漢族J, Kai H,卡托AC,彰年代,李JD:抑製p38 MAPK的糖皮質激素通過誘導MAPK phosphatase-1增強nontypeable嗜血杆菌influenzae-induced toll樣受體2的表達。生物化學雜誌。2002年,277:47444 - 47450。10.1074 / jbc.M208140200。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  53. Gilmore TD: NF-kB概論:球員,途徑,觀點。致癌基因。2006年,25歲:6680 - 6684。10.1038 / sj.onc.1209954。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  54. 黃銅匠AR: NF-kB監管網絡。Cardiovasc Toxicol。2006年,6:111 - 130。10.1385 / CT: 6:2:111。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  55. 帕金斯ND:將細胞信號傳導通路與NF-kB和IKK功能。Nat摩爾細胞雜誌。2007年,牧師8:49 - 62。10.1038 / nrm2083。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  56. 秦H,威爾遜CA,李SJ,趙X, Benveniste EN: LPS誘導基因表達CD40通過激活NF-kappaB和STAT-1alpha在巨噬細胞和小膠質細胞。血。2005年,106:3114 - 3122。10.1182 / - 2005 - 02 - 0759血。

    文章公共醫學中心中科院PubMed穀歌學術搜索

  57. 巴恩斯PJ:過敏性炎症的病理生理學。2011年Immunol啟,242:31-50。10.1111 / j.1600 - 065 x.2011.01020.x。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  58. Cormet-Boyaka E, Jolivette K, Bonnegarde-Bernard Rennolds J,哈桑F,梅塔P, Tridandapani年代,Webster-Marketon J, Boyaka PN: NF-kB-independent Erk1/2-dependent機製控製CXCL8 /引發呼吸道上皮細胞對鎘的反應。Toxicol科學。2012年,125:418 - 429。10.1093 / toxsci / kfr310。

    文章公共醫學中心中科院PubMed穀歌學術搜索

  59. 緒T,伯格DJ,湯普森AB,羅賓斯RA,繼承人,雷納德SI:香煙煙霧誘發interleukin-8釋放人類支氣管上皮細胞。我和中國國際廣播電台保健醫療。1997年,155:1770 - 1776。10.1164 / ajrccm.155.5.9154890。

    文章中科院穀歌學術搜索

  60. Witherden IR, Vanden Bon EJ, Goldstraw P,拉特克利夫C, Pastorino U,泰特利TD:主要人類肺泡II型上皮細胞趨化因子釋放:香煙煙霧和中性粒細胞彈性蛋白酶的影響。我和細胞雜誌。2004年,30日:500 - 509。10.1165 / rcmb.4890。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

  61. 拉赫曼,馬克尼W:氧化還原穀胱甘肽水平和基因轉錄的調節:肺部炎症的治療方法。自由·拉迪奇生物醫學雜誌。2000年,28日:1405 - 1420。10.1016 / s0891 - 5849 (00) 00215 - x。

    文章中科院PubMed穀歌學術搜索

下載參考

確認

作者感謝Annalisa費倫澤提供技術幫助和寫作援助。

的資金來源

這項研究是由Ricerca Corrente,意大利衛生部、意大利羅馬。Valeas公司。,Milan financed the study related to this manuscript, including the article-processing charge.

作者信息

作者和聯係

  1. 兒科過敏和肺病單元,史詹妮娜Gaslini,通過G Gaslini 5,熱那亞,16147年,意大利

    斯語的索尼婭的法令Silvestri & Giovanni羅西

作者
  1. 索尼婭的法令
    看來作者出版物

    你也可以搜索這個作者PubMed穀歌學術搜索

  2. Michela Silvestri
    看來作者出版物

    你也可以搜索這個作者PubMed穀歌學術搜索

  3. 喬凡尼的羅西
    看來作者出版物

    你也可以搜索這個作者PubMed穀歌學術搜索

相應的作者

對應到喬凡尼的羅西。

額外的信息

相互競爭的利益

雀鱔。在過去的五年裏收到補償,從Polichem S.A.費用和資金、盧森堡和Valeas公司。,Milan, Italy, that way gain or lose financially from the publication of this manuscript.

SC和女士不申報任何金融競爭的利益。

作者的貢獻

所有作者作出了實質性的貢獻研究的構思和設計,分析,解釋和采集的數據的數據。SC執行所有的女士在體外實驗和統計分析。2)所有作者都參與起草手稿和修改它至關重要的知識內容。所有作者閱讀和批準最終的手稿。

作者提交的原始圖像文件

權利和權限

開放獲取這篇文章發表在生物醫學中心有限公司的許可證。這是一個開放的文章是分布式知識共享歸屬許可的條款(https://creativecommons.org/licenses/by/2.0),允許無限製的使用、分配和複製在任何媒介,提供最初的工作是正確引用。

再版和權限

關於這篇文章

引用這篇文章

的法令,S。,Silvestri, M. & Rossi, G.A. Modulation of airway epithelial cell functions by Pidotimod: NF-kB cytoplasmatic expression and its nuclear translocation are associated with an increased TLR-2 expression.斜體字J Pediatr39,29歲(2013年)。https://doi.org/10.1186/1824 - 7288 - 39 - 29

下載引用

  • 收到了:

  • 接受:

  • 發表:

  • DOI:https://doi.org/10.1186/1824 - 7288 - 39 - 29

關鍵字

  • 反複呼吸道感染
  • 免疫刺激劑
  • Toll樣受體2
  • ICAM-1

beplay怎么下载安装

ISSN: 1824 - 7288

聯係我們

Baidu
map