的新型生物標誌物識別使用iTRAQ新生兒缺血腦病gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

一個提示診斷HIE臨床仍然是一個挑戰。本研究旨在識別潛在生物標誌物缺血腦病(HIE)新生兒通過小說的蛋白質組學方法,絕對和相對量化的等壓標簽(iTRAQ)方法。gydF4y2Ba

方法gydF4y2Ba

從新生兒輕度血液樣本采集(gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)、中度(gydF4y2BangydF4y2Ba= 4),或嚴重(gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)催促他們承認兒童醫院的新生兒重症監護室蘇州大學2015年10月至2017年10月。iTRAQ催促患者和健康對照組(gydF4y2BangydF4y2Ba= 4)。生物信息學分析包括基因本體和KEGG通路富集分析進行評估的潛在特性和功能鑒定差異表達蛋白質。gydF4y2Ba

結果gydF4y2Ba

一般共有51個差異表達蛋白質中發現比較溫和,溫和,和嚴重的催促以及健康對照組。結合珠蛋白(HP)患者最重要的上調和S100A8催促,進一步驗證通過實時聚合酶鏈反應和免疫印跡。差異表達蛋白質代表多個生物過程,細胞組件和分子功能和明顯豐富補充凝血級聯。gydF4y2Ba

結論gydF4y2Ba

惠普和S100A8可以作為一個潛在的生物標誌物對新生兒HIE和反映HIE的嚴重程度。補充與凝血級聯新生兒HIE的發展也起到關鍵作用。gydF4y2Ba

新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)是一種嚴重的新生兒腦損傷造成的asphyxia-related減少腦血流量和缺氧。據估計,400萬年大約有1.3億新生兒患有窒息每年在世界範圍內,其中100萬死亡,100萬發展嚴重和長期的後遺症gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。在中國,新生兒HIE的發生率大約是54000 - 108000年每年2000萬活產,其中8000 - 20000年死於新生兒期,25 - 30%的幸存者受到長期的後遺症如腦癱、癲癇,精神發育遲滯(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

趕快的早期診斷對後續治療和預後至關重要。然而,提示臨床診斷HIE仍然是一個挑戰部分由於其不清楚發病機製和快速發展。先前的研究顯示,生物標誌物如brain-specific蛋白(特異性神經元烯醇酶(研究),S100B、泛素carboxy-terminal hydrolase-L1,總τ)和細胞因子,包括白介素(IL) 6、IL-1β,IL - 10, IL-13,移行細胞,腫瘤壞死因子α和腦源性神經營養因子,有利於HIE的診斷和預測神經發育的結果(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。然而,最佳的敏感性和特異性的生物標記沒有被實現,限製了其臨床應用(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

蛋白質組學技術的發展帶來了新的希望新型生物標誌物的鑒定的疾病。作為一個關鍵組成部分之一的研究,蛋白質組學包括兩種研究策略,即“完全蛋白質組學”和“差異蛋白質組學”。差異蛋白質組學主要用於篩查不同樣本之間的差異蛋白質組。蛋白質組多樣性進一步揭示了生理和病理狀態的細胞,細胞活動的潛在機製,涉及的關鍵蛋白質的特點(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。到目前為止,據我們所知,沒有研究評價新生兒HIE利用蛋白質組學技術的生物標誌物。gydF4y2Ba

在最近的研究中,血清蛋白表達的異同新生兒HIE新生兒患者和健康之間被一本小說等壓標簽的絕對和相對定量(iTRAQ)的定量臨床蛋白質組學的方法。我們試圖確定新生兒HIE的新生物標誌物。我們的結果不僅提供了一個理論依據發現新生兒HIE的疾病發病機製,但也可以作為科學依據的發展進一步的治療策略。gydF4y2Ba

研究群體gydF4y2Ba

在這個前瞻性研究,足月新生兒確診為HIE和承認的新生兒重症監護單位蘇州大學兒童醫院2015年10月至2017年10月被錄取為HIE組。HIE的診斷是基於2004年修改HIE新生兒學的診斷和分度標準組中華醫學會兒科學會(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。所有催促患者第一個出生後3天內進行評估。健康足月新生兒出生在蘇州市級醫院的同一時期的特征包括性別、出生體重、和交付模式也與HIE組被選為控製。患者嚴重感染、畸形、膽紅素腦病或不完整的數據被排除在HIE組。對照組患者排除在如果他們有窒息或者懷孕的母親潛在疾病。總共12催促患者(4對於每個HIE組,輕微的催促,中度催促和重度HIE)和4健康對照組為iTRAQ分析選擇。這些催促患者隨機選擇從57最初登記病人,其中包括27例輕度HIE, 16溫和的催促,14嚴重的催促。十六歲健康的患者作為對照組。gydF4y2Ba

數據收集gydF4y2Ba

特征包括性別、胎齡、出生體重、交付模式,和住院時間被記錄了下來。一般條件包括意識、肌張力、反射、抽搐、呼吸衰竭、瞳孔變化進行評估。實驗室測量和放射成像進行。gydF4y2Ba

樣品製備gydF4y2Ba

所有患者和健康對照組相近的年齡(37-38周)。收集血液樣本(3毫升)在出生後開始治療之前。健康對照組,收集相同數量的血液樣本。血液樣本沒有低溫治療期間收集的。所有血液樣本被收集在EDTA管,以及等離子體是通過離心10分鍾3000克。等離子體被整除,儲存在−80°C。免疫球蛋白(免疫球蛋白)和白蛋白從樣本中刪除(40μl)使用Qproteome白蛋白/免疫球蛋白損耗工具包(美國試劑盒,瓦倫西亞,CA)。樣本枯竭之後,這些豐富的蛋白質,離心機在12000 g。每個樣品的蛋白質含量測定用皮爾斯BCA蛋白質化驗(美國熱費希爾科學,羅克福德,IL)。蛋白質從每個樣本(15μg)相隔十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯酰胺凝膠電泳(頁麵)12%聚丙烯酰胺凝膠和沾Coomassie藍色。 The stained gel was scanned by the Image Scanner (GE Healthcare, USA) at a resolution of 300 dots per inch.

提取的蛋白質(100μg)與胰蛋白酶消化在37°C。肽從過濾與篩選了100毫米碳酸氫銨緩衝和純化。iTRAQ標簽隨後執行使用一個8-plex iTRAQ標簽工具包(美國AB Sciex;目錄:4381664)根據製造商的協議。113年和114年控製被貼上iTRAQ試劑;輕度HIE樣本與iTRAQ試劑115和116;與117年和118年溫和催促樣品;嚴重的催促樣品與119年和121年。四組的標簽消化樣品被融合進一個管。gydF4y2Ba

質/ MS分析gydF4y2Ba

EASY-nLCTM 1200 UHPLC係統(美國熱費希爾,沃爾瑟姆,MA)耦合到一個Orbitrap問Exactive HF-X質譜儀(熱費希爾)。列擠滿了ChromXP C18(100μm×3厘米,3μm, 150 A, Eksignet)被用於在線捕獲和淡化,而列擠滿了鉻XP C18(75μm×15厘米,使用C18, 3μm, 120 A, Eksigent)被用於分析分離。流動相是由乙腈/水/甲酸(ACN-H2O-FA 2: 98: 0.1, v / v / v),和移動階段B ACN-H2O-FA (95: 5: 0.1, v / v / v)。樣本加載在列進行捕獲和脫鹽3μL /分鍾10分鍾用流動相答:分析分離了300 nL /分鍾的流量。關鍵參數設置包括一年級女士分辨率為70000的參數,自動增益控製(AGC)的目標1 e6,和掃描範圍300 ~ 1800 m / z;和二年級女士參數的分辨率為35000,AGC的目標5 e5,最大離子積累時間(100毫秒),首選動態排斥30多歲的時候,和標準化的碰撞能量(指標)/走28出版社。gydF4y2Ba

數據庫搜索和分析差異表達的蛋白質gydF4y2Ba

蛋白質識別使用蛋白質組進行發現者™軟件(版本1.3,熱科學)。原始文件被轉換為一個ProteinPilot兼容吉祥物通用格式(MGF)預選iTRAQ記者離子。針對Uniprot文件搜索gydF4y2Ba智人gydF4y2Ba以下搜索參數:數據庫樣本類型,iTRAQ 8-plex(肽標記);Cys-alkylation碘乙酰胺;胰蛋白酶消化;儀器,問Exactive;數據庫,gydF4y2Ba智人gydF4y2Ba;和Fasta。gydF4y2Ba

蛋白質識別錯誤發現率1%(羅斯福)的信心閾值為95% (Proteinpilot未使用的評分≥1.2)和運行gydF4y2BapgydF4y2Ba值小於0.05在至少一個成對比較保留。gydF4y2Ba

生物信息學分析差異表達蛋白質gydF4y2Ba

功能分析是通過OmicsBean癌症數據分析平台。有關數據庫迅速(gydF4y2Bahttps://www.ebi.ac.uk/QuickGO/gydF4y2Ba)和《京都議定書》百科全書的基因和基因組(KEGG)通路(gydF4y2Bahttp://www.kegg.jp/kegg/patyway.htmlgydF4y2Ba)。基因本體論(去)分析包括生物過程,細胞組件和分子功能。KEGG途徑進行分析識別途徑集群。一個gydF4y2BapgydF4y2Ba值小於0.05設置為截止準則。gydF4y2Ba

聚合酶鏈反應(PCR)分析和生物標記物的免疫印跡分析驗證gydF4y2Ba

樣品的總RNA被隔離在兩個步驟使用試劑盒試劑(美國表達載體,卡爾斯巴德,CA)其次是RNeasy(試劑盒)淨化,然後接受逆轉錄。結合珠蛋白(HP)、S100A8載脂蛋白E (APOE)和載脂蛋白M (APOM)表達水平放大與引物(5′-TAGAGACCGAGTGTCCTCA-3′, 5′-CGCCCATCTTTATCACCAGA-3′, 5′-CAGCACAGTCCCCGAAAAGAA-3′, 5′- CAGTCGCATACCAGGTGTCC-3′, 5′-TGACGCTGGGGCTGGCATTG-3′, 5′-GCTCTTGCTGGGGCTGGTGG-3′, 5′- GTTGCTGGTCACATTCCTGG-3′, 5′- GCAGGTAATCCCAAAAGCGAC-3′, 5′- GCTACCATCCGCATGAAAGAT-3′, 5′- CTGGCCTGTCTCATTCAGCA-3′)。PCR反應進行的10μL卷包含2×SYBR綠色主人混合和反應是使用熒光實時定量PCR(瑞士羅氏公司LightCycler 480,羅氏)。5分鍾的放大參數95°C;其次是45 95°C的周期為1分鍾,20年代60°C,並為20年代72°C。β-actin作為內部控製以確保cDNA質量和加載精度。為每一個記錄,每一個互補脫氧核糖核酸樣本一式三份分析。表達比較不同目標的評估是由ddCt比較閾值(gydF4y2Ba^{ΔΔgydF4y2Ba}Ct)方法。gydF4y2BaPgydF4y2Ba值測定的小動物——一張長有成對的學生的學習任務。gydF4y2Ba

血漿蛋白分離通過sds - page和轉移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜。膜被封鎖的阻斷劑然後孵化主要抗體的濃度1:1000(聖克魯斯生物技術、聖克魯斯、鈣、美國),一夜之間在4°C,緊隨其後的是二次抗體的濃度1:5000(聖克魯斯生物技術)在室溫下1 h。西方成像係統(熱費希爾科學)是用於獲取圖像和分析目標蛋白表達。gydF4y2Ba

統計分析gydF4y2Ba

統計分析進行了使用SPSS統計22.0(美國、IBM、紐約Armonk)。圖是準備使用GraphPad棱鏡7軟件(GraphPad, Inc .,聖地亞哥)。變量被稱為均值±標準差或中位數(四分位)。連續變量比較t檢驗或Mann-Whitney U測試,而分類數據比較與卡方檢驗或確切概率法。組間差異蛋白表達進行了分析使用一個學習任務。的p值小於0.05被認為是具有統計學意義。gydF4y2Ba

催促患者和健康對照組的基線特征gydF4y2Ba

的12例HIE iTRAQ分析,男性和女性患者占7(58.3%)和5(41.7%)情況下,分別。血樣撤回之前的起始治療的平均時間內出生後5.19±2.12 h。健康對照組,相同數量的血液樣本被撤回的平均時間6.46±1.79 h出生後。沒有明顯差異在性別和時間采樣之間的催促和對照組(兩種gydF4y2BapgydF4y2Ba> 0.05)。gydF4y2Ba

差異表達的蛋白質被iTRAQ分析gydF4y2Ba

從輕度HIE的比較例與控製,69發現了不同分布式蛋白質,包括18個差異蛋白質和51抑製蛋白質。顯著差異表達的蛋白質被說明在火山的陰謀,和蛋白質的表達水平在每個樣本在層次聚類熱圖(圖可視化。gydF4y2Ba1gydF4y2Baa、b)。從比較溫和的催促的情況下與控製,115發現了差異表達的蛋白質,其中27人被上調,88被抑製(圖。gydF4y2Ba1gydF4y2Bac, d)。從嚴重催促病例與控製的比較,確定了133個差異表達的蛋白質,包括14個差異蛋白質和119年抑製蛋白(無花果。gydF4y2Ba1gydF4y2Bae、f)。gydF4y2Ba

識別通常在上述三個比較差異表達蛋白質,維恩圖繪製和顯示在多個比較(圖51蛋白質被確定。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba、表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

生物信息學分析差異表達蛋白質gydF4y2Ba

去分析探討了生物過程(BPs),電池組件(CC)和分子功能(MF)與前20位最積極的和消極的調節蛋白質。比較輕度HIE有控製的情況下,英國石油公司參與的差異表達蛋白質包括損傷反應,急性炎症反應,炎症反應。涉及CCs是細胞外空間,細胞外膜的細胞器,液。參與MFs包括肽酶調控劑,肝素結合,粘多糖綁定。KEGG分析顯示明顯差異表達蛋白質豐富補充凝血級聯。蛋白質最溫和的催促例之間的分化和控製相關的BPs, CCs和MFs類似的蛋白質差異表達之間的輕度HIE病例和控製。個基點的微小差異,CCs和MFs被發現(圖。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

驗證識別潛在的生物標記物gydF4y2Ba

八個健康的新生兒,19患者輕度HIE,與溫和的催促,8和6有嚴重趕快選擇進行進一步的驗證iTRAQ發現。PCR結果顯示,與iTRAQ的結果一致,惠普和S100A8上調催促患者。然而,衝突的結果為蛋白質APOE和APOM被觀察到。免疫印跡分析(gydF4y2BangydF4y2Ba為每個組= 4)進一步驗證表達式的增加惠普和S100A8催促患者(無花果。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

目前的研究調查新生兒HIE的診斷的生物標誌物篩選催促患者和健康對照組之間差異表達蛋白質。我們所知,本研究是第一個使用小說iTRAQ技術檢測新生兒HIE的潛在生物標誌物。我們發現S100A8可以作為一個潛在的生物標誌物和惠普與催促密切相關。生物信息學分析表明,補充和凝血級聯新生兒HIE的發展發揮著至關重要的作用。gydF4y2Ba

我們的研究結果證實,S100A8表達明顯升高在所有三組的催促患者和反映HIE的嚴重程度。沒有證據表明S110A8之間的關係和催促之前已經報道過了。然而,作為一種重要的S100蛋白家族成員,S100A8參與許多生理功能包括炎症反應和鈣穩態調節通過結合S100A9 [gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。S100A8 / A9複雜的報道能夠抑製促炎細胞因子過度氧化,促進生產(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。S100A8 / A9複雜也已被證明參與多種疾病如哮喘和類風濕性關節炎gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。腦損傷患者,S100A8 / A9複雜被證明參與腦缺血再灌注損傷的早期階段(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。先前的研究表明,S100A8 / A9介導早期炎症反應通過激活小膠質細胞的神經損害toll樣受體4 (TLR4) /核轉錄因子k B (NF-κB)和受體對於高級糖化成品(憤怒)/ NF-κB信號通路(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。因此,S100A8可能是一個潛在生物標誌物HIE的診斷和監測疾病進展。gydF4y2Ba

惠普蛋白質抑製hemoglobin-related大腦炎症反應,惠普和高表達可能表明HIE的發展(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。我們觀察到一個一致的惠普表達增加患者獨立催促的嚴重性,表達的趨勢並沒有與嚴重程度平行。惠普是一種急性期蛋白質最豐富的內生hemoglobin-binding蛋白質在等離子體gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。研究表明,惠普表示在大腦和神經保護作用[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。惠普可以保護神經元的細胞毒性效應hemolysates後顱內出血,這是催促的主要表現之一。惠普作為一種抗氧化劑可以去除遊離血紅蛋白從循環,保護後續損傷由於氧自由基(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。在嚴重脊髓損傷患者,惠普表達增加(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。先前的體內和體外研究報道,惠普在大腦的老年病主要由少突膠質細胞(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。然而,惠普在新生兒表情很少研究。我們的研究結果意味著惠普快走的可能是一個明確的標誌,尤其是輕度HIE或早期的催促。gydF4y2Ba

生物信息學分析表明,損傷反應,炎症反應和蛋白質激活級聯是重要的生物過程在催促的發展。更重要的是,KEGG路徑分析顯示,補充凝血瀑布最參與所有組。補充蛋白質主要存在於人類血液和組織液以及在細胞表麵。他們在免疫調節功能,免疫防禦和吞噬作用增強gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。研究表明,通過激活血腦屏障受損補充蛋白質,促進組胺和溶酶體酶的釋放,增加血管通透性(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。大腦的變性和壞死引起炎症通過激活補體係統(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。在催促的大鼠模型,研究人員發現的受體C3a ca5主要表達在催促後小膠質細胞,和體溫過低可能改善結果通過調節補充係統(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

我們的研究基於iTRAQ表明凝血途徑極大地參與催促的發展。凝血障礙已被證明是新生兒窒息的主要後果之一(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。凝血障礙後新生兒HIE有多因子的機製。血小板及凝血因子的合成抑製由於血液和氧氣供應不足(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。播散性血管內凝血是經常出現在新生兒患有窒息(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。此外,低溫治療可能會擾亂止血凝血級聯的放緩酶功能,抑製凝血酶生成和觸發播散性血管內凝血(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。早期幹預與凝血功能可以改善預後與HIE新生兒。我們的結果證實了概念,凝血通路中發揮著重要作用的進展快走。gydF4y2Ba

有幾個限製在當前的研究中。首先,研究樣本很小由於iTRAQ測量的局限性。第二,我們沒有驗證所有的差異表達蛋白質。然而,我們的研究結果在一定程度上符合概念,多器官和響應係統包括氧化/炎症和凝血級聯的發展快走(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。研究之間的不同結果也可能被解釋成不同的測量時間和相關的短期或長期的結果。此外,敏感性和特異性的不同可能影響測量結果。第三,我們沒有分析潛在的生物標記物之間的關係和其他客觀測量反映大腦核磁共振等長期結果。更精確的腦成像和腦功能評估可能為生物標誌物的檢測提供進一步的信息。在先前的研究評估生物標誌物和催促的結果之間的相關性,升高血漿brain-specific蛋白質包括S100B在出生後第一個24小時與HIE新生兒腦損傷檢測到核磁共振(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。然而,S100B沒有發現與神經發育的結果(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。預測和預後的生物標記物可以指導治療策略可能是至關重要的。gydF4y2Ba

我們的研究基於iTRAQ確定S100A8和惠普蛋白質作為新生兒HIE的潛在生物標誌物和補充凝血級聯新生兒HIE的發展一樣重要。gydF4y2Ba

和/或使用的數據集分析在當前研究可從相應的作者以合理的要求。gydF4y2Ba

催促:gydF4y2Ba

新生兒缺氧缺血性腦病gydF4y2Ba

分析了無:gydF4y2Ba

特異性神經元烯醇酶gydF4y2Ba

il - 6:gydF4y2Ba

白細胞介素- 6gydF4y2Ba

iTRAQ:gydF4y2Ba

絕對和相對定量的等壓標簽gydF4y2Ba

免疫球蛋白:gydF4y2Ba

免疫球蛋白gydF4y2Ba

SDS:gydF4y2Ba

十二烷基硫酸鈉gydF4y2Ba

頁麵:gydF4y2Ba

聚丙烯酰胺凝膠電泳gydF4y2Ba

ACN-H2O-FA:gydF4y2Ba

乙腈/水/甲酸gydF4y2Ba

自動增益控製:gydF4y2Ba

自動增益控製gydF4y2Ba

它:gydF4y2Ba

離子積累時間gydF4y2Ba

出版社:gydF4y2Ba

規範化的碰撞能量gydF4y2Ba

MGF:gydF4y2Ba

吉祥物通用格式gydF4y2Ba

羅斯福:gydF4y2Ba

錯誤發現率gydF4y2Ba

KEGG:gydF4y2Ba

京都基因和基因組的百科全書gydF4y2Ba

走:gydF4y2Ba

基因本體論gydF4y2Ba

聚合酶鏈反應:gydF4y2Ba

聚合酶鏈反應gydF4y2Ba

惠普:gydF4y2Ba

結合珠蛋白gydF4y2Ba

載脂蛋白e:gydF4y2Ba

載脂蛋白EgydF4y2Ba

APOM:gydF4y2Ba

載脂蛋白米gydF4y2Ba

PVDF:gydF4y2Ba

聚偏二氟乙烯gydF4y2Ba

不適用。gydF4y2Ba

這項工作得到了國家自然科學基金(81471488,81671532,81771625,81871193);江蘇省重點學科(沒有。ZDXKA2016013);江蘇省重點研究和發展的專項資金在中國(沒有。BE2015644);江蘇省醫學青年Talentthe江蘇省醫學青年人才(QNRC2016758 QNRC2016763);江蘇省婦女和兒童健康研究項目(沒有。F201750);中國蘇州市公共衛生技術項目(SYS201765);兒科臨床中心中國蘇州市(Szzx201504)。gydF4y2Ba

作者指出gydF4y2Ba

1. 朱淵源和Yajing Yun同樣這項工作。gydF4y2Ba

作者和聯係gydF4y2Ba

1. 新生兒學、東吳大學兒童醫院,蘇州,中國gydF4y2Ba

   阿寶的淵源,Yajing Yun,李紅苗,鑫鼎興豐&本太陽gydF4y2Ba

2. 兒科研究所,東吳大學兒童醫院,蘇州,中國gydF4y2Ba

   Meifang金創Li & Lixiao徐gydF4y2Ba

貢獻gydF4y2Ba

XLX和ZYY主要負責研究設計,數據分析和手稿準備。YYJ參與樣本收集和準備草案手稿。JMF和LG進行免疫印跡和qPCR實驗。LH和FX參與臨床資料分析。某人的貢獻研究進行實驗設計和提供了寶貴的建議。所有作者閱讀和批準最終的手稿。gydF4y2Ba

相應的作者gydF4y2Ba

對應到gydF4y2BaLixiao徐gydF4y2Ba或gydF4y2Ba本的太陽gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

倫理批準和同意參與gydF4y2Ba

本研究經醫院倫理委員會批準(2015號倫理lw002)和知情同意獲得病人的法定監護人。gydF4y2Ba

同意出版gydF4y2Ba

不適用。gydF4y2Ba

相互競爭的利益gydF4y2Ba

作者宣稱沒有利益衝突。gydF4y2Ba

出版商的注意gydF4y2Ba

beplay外围下载施普林格自然保持中立在發表關於司法主權地圖和所屬機構。gydF4y2Ba

開放獲取gydF4y2Ba本文是基於知識共享署名4.0國際許可,允許使用、共享、適應、分布和繁殖在任何媒介或格式,隻要你給予適當的信貸原始作者(年代)和來源,提供一個鏈接到創作共用許可證,並指出如果變化。本文中的圖片或其他第三方材料都包含在本文的創作共用許可證,除非另有說明在一個信用額度的材料。如果材料不包括在本文的創作共用許可證和用途是不允許按法定規定或超過允許的使用,您將需要獲得直接從版權所有者的許可。查看本許可證的副本,訪問gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/gydF4y2Ba。知識共享公共領域奉獻豁免(gydF4y2Bahttp://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/gydF4y2Ba)適用於數據可用在這篇文章中,除非另有說明在信貸額度的數據。gydF4y2Ba

再版和權限gydF4y2Ba