暴露於。的新生兒特異性抗體效價下降剛地弓形蟲還有他們的母親

背景

嬰兒在子宮內暴露於剛地弓形蟲在美國，目前的指南建議監測特異性抗體效價直到12個月大。在本研究中，我們調查了抗體滴度衰減的母親-嬰兒對。

方法

這是一項單中心、基於人群的新生兒隊列研究剛地弓形蟲2014年1月至2020年12月。所有嬰兒都接受了至少12個月的臨床、實驗室和儀器檢查。

結果

共有670名符合條件的新生兒被轉到那不勒斯費德裏科二世大學的圍產期感染部門。636名(95%)完成了血清學隨訪，直到12個月。特異性IgG抗體陰性628例(98.7%)。9個月和12個月時，所有患者IgG抗體均為陰性。初始新生兒IgG抗體滴度≥200 IU/ml與陰性時間較長相關(高於閾值時184天[177.5;256]天，低於閾值時139.5天[101;179]天;p< 0.001)。分娩時母親IgG抗體滴度≥200 IU/ml也與嬰兒到陰性的延遲時間有關(高於閾值179[163;184]天，低於閾值125[96.8;178]天;p< 0.001)。特異性抗體陰性在所有患者中是不可逆的。

結論

較低的反弓形蟲在出生時檢測到的抗體滴度在母親-嬰兒二元導致早期和不可逆的陰性。這些信息允許定製嬰兒隨訪計劃，並避免侵入性和昂貴的測試。

先天性弓形蟲病(CT)是絨毛膜視網膜炎、顱內鈣化、腦積水以及潛在的嚴重和永久性神經功能缺陷(精神運動延遲或其他神經功能缺陷、癲癇和智力遲鈍)的重要原因[beplay2官网 ，盡管大多數嬰兒在出生時表現為無症狀。

出生後不久，對感染進行臨床和儀器檢查。診斷主要依靠IgM和/或IgA滴度陽性，檢測羊水或腦脊液中剛地弓形蟲DNA，或腦脊液中IgM/IgA陽性[beplay2官网 ，beplay2官网 ］．當出生時不具備診斷標準時，超過12個月時特異性抗體持續存在被認為是先天性感染的公認證明[beplay2官网 ，beplay2官网 ］．為此，無症狀的嬰兒定期抽血，這既有侵入性又昂貴。更短的、定製化的實驗室隨訪是可取的，但目前缺乏可靠的預測指標。

目前以人群為基礎的隊列研究調查了這樣一種假設，即最初在母親-嬰兒組中檢測到的較低的弓形蟲抗體滴度可能導致早期和不可逆的陰性。這一信息將為減少嬰兒的痛苦和衛生係統的費用提供堅實的基礎。

根據Lebech分類係統和病例定義定義產婦感染[beplay2官网 ］．妊娠期血清轉換為“1.1.1”例，具有較高的垂直傳播風險。在選定的病例中，用PCR技術在羊水中檢測弓形蟲DNA證實診斷。的提取剛地弓形蟲根據之前報道的製造商說明，使用extrblood試劑盒(ELITech group, Molecular Diagnostic s.p.a.)進行DNA檢測[beplay2官网 ］．通過Real - Time PCR和弓形蟲g. Elite MGB試劑盒(ELITech集團，分子診斷s.p.a)進行鑒定，該試劑盒可特異性檢測弓形蟲的RE區剛地弓形蟲(在微生物基因組中重複200到300次的短序列)。

然後，根據具體指南，在接受適當治療(螺旋黴素或與乙胺嘧啶、磺胺嘧啶和葉酸聯合治療)的同時，將準媽媽轉介進行臨床和超聲隨訪[beplay2官网 ］．嬰兒在出生後的第一個月內接受了中樞神經係統的儀器評估，同時進行了眼部檢查和聽覺測試。頭顱超聲檢查(US)由一名經驗豐富的新生兒醫生完成，該醫生對臨床數據不知情，使用Philips HD11超聲成像平台，配有8.5-12.4 MHz換能器(micro凸和相控陣換能器)。眼底檢查由一名精通先天性感染的兒科眼科醫生進行。聽力功能在出生時通過暫時性誘發耳聲發射(TEOAE)進行評估，如果之前的評估不正常，在出生三個月後通過自動聽性腦幹反應(ABR)進行評估。

采集母親和新生兒配對血清樣本，測定IgG、IgA和IgM抗體水平。反弓形蟲使用VIDAS儀器(Biomerieux SA)自動定量檢測患者血清中IgG和IgM抗體以及IgG- avidity。該檢測原理結合了兩步酶免疫夾芯法和最終熒光檢測(酶聯熒光分析- elfa)。用於抗的定性檢測弓形蟲IgA,在體外使用診斷試劑盒platlia™TOXO IgA TMB (Bio-Rad)，這是一種固相免疫酶雙夾心法，捕獲IgA抗弓形蟲在固相。

IgG和IgM抗體以國際單位/ml (IU/ml)表達，分別小於8 IU/ml和0.65 IU/ml時為陰性。IgG的上檢限為300 IU/mL。滴度等於或大於300 IU/mL通常被認為是高[beplay2官网 ］．IgA抗體結果按公式計算簡單比(Simple Ratio)表示:樣本od_{450/620 nm}/平均過量。_{450/620 nm}截止。樣品指數≥1為陽性。

數據被記錄在一個標準化數據庫中。

病人

本研究前瞻性收集了2014年1月至2020年12月期間在那不勒斯“費德裏科二世大學”圍產期感染科收集的數據，該大學是一家三級護理醫院，擁有專門的多學科團隊。

研究納入標準為新生兒血清IgG陽性、IgM陰性和/或IgA陰性。在2和3月齡時進行抗體測定，然後每兩個月進行一次，直到完全陰性。後者在30天後被證實，並在一歲時提供最終抗體測定[beplay2官网 ］．在不令人放心的效價下降的情況下，遵循不同的時間表。

排除標準包括:家長拒絕參與;有檢測史的新生兒剛地弓形蟲羊水裏的DNA和/或陽性抗弓形蟲IgM和/或IgA血清學檢查，然後接受早期活動性CT診斷[beplay2官网 ，beplay2官网 ];完整的臨床、放射學和實驗室評估後的CT證據;未完成12個月隨訪的嬰兒。

數據分析

統計分析采用R軟件環境進行統計計算。

數據以中位數(I四分位;四分位數)表示數量變量，頻率(百分比)表示類別變量。

對於分類變量，顯著性關聯的檢驗使用卡方檢驗與連續性修正。用Pearson相關係數分析定量變量之間的相關性。定量變量組間比較采用Wilcoxon檢驗和Bonferroni方法進行多重比較校正。

P< 0.05為有統計學意義。

種群特征(圖。beplay2官网 ）

在研究期間，在圍產期感染科通過產前診斷(羊膜穿刺術陽性)、出生時IgM和/或IgA陽性或特定臨床體征做出的CT診斷有46例，因此未納入研究。在符合納入標準的總共670名新生兒中，636名(95%)完成了隨訪直到12個月，並被納入研究。

產婦病史和新生兒特征資料彙總於表中beplay2官网 ．大多數感染發生在妊娠前三個月(467例，占73.4%)。79例(12.4%)妊娠期間發生血清轉換(Lebech分級“1.1.1”):21例發生在妊娠早期，37例發生在妊娠中期，21例發生在妊娠晚期。119名母親報告有不安全的飲食習慣(19%);52名(8%)女性是養寵物的，她們在分娩時的IgG滴度高於不養寵物的女性(137 [78;205.8]vs 101 [63.8-164.2]，p= 0.027)。產婦分娩時的IgG滴度與懷孕期間的症狀或不安全的加熱習慣沒有統計學上的關聯。

管理及跟進

采集的第一份血樣(T0)顯示，35名母親(5.5%)和10名新生兒(1.6%)的IgG滴度高於300 IU/mL。在這35位母親中，Lebech將5位(14.3%)歸為“1.1.1”;10個IgG效價高於300 IU/mL的新生兒均未由妊娠期血清轉換的母親所生。根據Lebech分級，較高的產婦和新生兒IgG滴度與高危級別無關(p分別為0.595和p 0.410)。出生1個月(T1)和2個月(T2)後，特異性IgG抗體分別陽性630例(99.1%)和585例(92%)。3個月(T3)時，388例新生兒(61%)仍檢出特異性IgG。在5個月(T5)時，僅有8例(1.3%)仍呈陽性。在7 (T7)和12 (T12)月齡時，所有新生兒均呈陰性(圖。beplay2官网 )．根據Lebech的分類，到陰性的時間與高風險類別無關(p= 0.108)。

考慮到抗體濃度超過300 UI/mL的母親和新生兒數量較少，我們使用閾值200 UI/mL進行後續分析。

新生兒初效價與出生時母體抗體濃度有關(r= 0.71;p< 0.001)。陰性時間與母體和新生兒IgG初始值直接相關(r= 0.71,p< 0.001和r= 0.60,p分別< 0.001)。此外，陰性時間與產婦分娩時滴度和新生兒初始滴度直接相關，根據IgG的間隔(8-100 UI/mL, 101-199 UI/mL，≥200 IU/mL)將母嬰人群分為三組，如圖所示。beplay2官网 ．考慮到分娩時母親滴度，第一組患兒到陰性時間的中位數為105天[84;141]，第二組為171天[125;182]，第三組為179天[163;184]。考慮到新生兒初效價，第一組患兒到陰性的時間中位數為125天[98;178]，第二組為179天[172;184]，第三組為184天[177.5;256]。

出生180天陽性與分娩時母體抗體值高於200 UI/mL閾值相關(12.6% vs 35.6%)。p< 0.001)。如果我們考慮出生時的新生兒值(1.2% vs 9.1%，p< 0.001)。

特別是，518名母親分娩時IgG滴度< 200 UI/mL的嬰兒比118名母親分娩時IgG滴度≥200 UI/mL的嬰兒特異性IgG的陰性時間要早[125天(96.8;178) vs 179天(163天;184) -p< 0.001)。此外，615個IgG滴度< 200 UI/mL的嬰兒比21個IgG滴度≥200 UI/mL的嬰兒更早檢測到特異性IgG的陰性[139.5天(101;179) vs 184天(177.5;256年),p< 0.001)。

特異性IgG的陰性在所有被測嬰兒中是不可逆的。

隻要有明確的血清學狀況和臨床表現，就可以在出生時進行CT診斷。在對孕婦實施嚴格的篩查、隨訪和治療方案時，妊娠期血清轉化和疑似感染的總發生率為0.8 / 1000活產，先天性弓形蟲病的發生率為0.1 / 1000活產[beplay2官网 ］．假設母嬰傳播率為25% [beplay2官网 ]，高達75%的無先天性感染的嬰兒出生時血清學呈陽性。根據專家的共識，如果特定的IgG在12個月的生命是陰性的先天性感染是斷然排除的。為了避免錯過任何遲發診斷和隨後對預後有負麵影響的延誤治療，這些嬰兒至少接受5次實驗室評估[beplay2官网 ，beplay2官网 ］．

在一個大隊列中，我們顯示了母體和新生兒初始IgG滴度與抗體陰性時嬰兒年齡之間的顯著相關性，這表明對於抗體快速無法檢測到的兒童，可以考慮減少實驗室評估的數量。在我們5個月大的人群中，隻有8個嬰兒(1.3%)仍然呈陽性，到7個月大時全部呈陰性。所有後來陰性的嬰兒的母親在分娩時的IgG滴度≥200 UI/mL，他們自己最初的IgG滴度≥200 UI/mL。此外，沒有兒童出現先前陰性特異性IgG的複發。

即使在晚期產婦血清轉換的情況下，胎兒感染的風險較高，出生時低的產婦和新生兒滴度與嬰兒早期陰性有關，沒有後來的IgG升高和隨後的CT診斷。

孕婦在妊娠晚期發生血清轉換是一種已知的情況，胎兒感染的風險較高，在我們的研究係列中，21例晚期血清轉換中有17例抗體滴度較低(即< 200UI/ml)。有趣的是，沒有一個嬰兒被CT診斷，因為他們都顯示早期陰性，沒有抗弓形蟲IgG反彈。

根據這些數據，當出現陰性時，建議在1歲後直接重複血清學評估，從而減少患者及其家人和醫療係統的壓力。我們計算出，考慮到每次實驗室工作的成本為20歐元，那麼每個病人的總支出總計為140歐元。每年平均減少150名患者的血清學評估，每年可能節省5500歐元。

我們的數據表明，一旦陰性發生，可以建議稍微簡化的實驗室工作時間表。這意味著對患者的壓力和醫院費用有微小但可觀的減少。

對於初始抗體滴度高於300 IU/ml閾值的成對患者，我們建議采用目前的隨訪方案。

早期CT診斷的實施方案也可以通過更具體的血液測試來實現。Capobiango JD等人[beplay2官网 ]描述了一種比較母親和嬰兒出生時或出生後不久的IgG和IgM免疫譜的免疫印跡試驗。Mahmoudi S等人描述了一種幹擾素- γ釋放試驗(IGRA)，通過刺激感染新生兒的t細胞來實現早期CT診斷弓形蟲抗原(beplay2官网 ］．

後一種測試在我們的初步經驗中顯示了有希望的結果，但目前由於實驗室程序的高成本而受到限製。

總之，嬰兒產前暴露於弓形蟲出生時特定滴度低於200 IU/ml的嬰兒，可以安全地受益於包括血清學評估直到陰性，然後直接在12個月大的時候進行隨訪計劃，從而大大減輕了嬰兒的壓力，為衛生保健係統節省了寶貴的資金。

由於個人隱私可能受到侵犯，目前研究過程中生成和分析的數據集尚未公開，但可在通信作者提出合理要求的情況下向其提供。

CT:

先天性弓形體病

CSF:

腦脊髓液

我們:

顱超聲

TEOAE:

短暫誘發耳聲發射

上:

自動聽覺腦幹反應

愛兒坊:

酶聯熒光法

幹擾素釋放:

幹擾素釋放試驗

作者感謝Ivy Betts女士對手稿的英文修訂。

我們感謝所有參與本次研究的兒童受試者和他們的家庭。

這份出版物的作者沒有得到任何研究經費。

從屬關係

1. 費德裏科第二大學轉化醫學科學係新生兒科，意大利那不勒斯，Via Pansini 5,80131

   Serena Salomè， Claudia Grieco, Pasquale Fabio Barra, Eleonora Capone, Fiorentino Grasso, Francesca Carraturo, Letizia Capasso & Francesco Raimondi

2. 費德裏科二世大學公共衛生係，意大利那不勒斯

   帕斯誇裏溫柔的

3. 意大利那不勒斯費德裏科第二大學分子醫學和醫學生物技術係

   Paola塞爾瓦托

貢獻

SS設計了研究，解釋了結果並起草了文章。CG、PFB、EC和FC參與數據采集。PD對患者資料進行分析和解釋。PS進行血清學分析。LC和FG對修訂草案和數據解釋作出了貢獻。FR構想了這項研究，並對文章的重要知識內容進行了批判性修改。所有作者閱讀並批準了最終稿件。

相應的作者

對應到瑟瑞娜莎樂美．

倫理批準和同意參與

本研究所倫理委員會(Comitato Etico“Carlo Romano”，Università Federico II di Napoli)批準了這項研究(第98/17號方案)。參與研究的兒童的父母或法定監護人同意參與研究。

發表同意書

發表同意書已取得參與研究兒童的父母或法定監護人的同意。

相互競爭的利益

作者聲明他們沒有競爭利益。

出版商的注意

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